在方法优化过程中，经过色谱柱(苯基柱、C18柱)、流动相的组成、柱温和PH值等色谱条件的巨大改变，12.854分钟的杂质峰（也即杂质A）一直是前沿峰，见下图红框，峰前沿不明显，凭感觉隐隐约约杂质A包含了一个杂质，这种感觉很像这个
案例：实验室那些事：峰前沿的假象
是什么杂质，如影随形又阴魂不散地与杂质A难舍难分，先了解下杂质A的结构式，六元环上有一个手性中心，有一个对映异构体，难道真是因为异构体导致峰前沿吗！如果要证明假设成立，那么是否要把它们分离呢，当然不需要，可以合并计算即可
由于杂质A的校正因子为0.3，如果是未知杂质，相当于把未知杂质的含量少计算了，故此必须要分离
对于苯环或环上邻位、间位、对位的同分异构体，通过疏水性的差异来分离不太可能，5氟苯基柱可提供π-π作用、偶极-偶极作用
故替换为5氟苯基柱，其它色谱条件不变的情况下，从杂质A中分离了出一个未知杂质，见下图
要使两个杂质进一步分离：
1、继续筛选不同品牌的5-氟苯基柱
2、减少粒径，由5um减少为3um的同品牌柱子
3、环上含有氢键作用位点，甲醇作为质子给予体，与5氟苯基柱有很好的搭配。而乙腈同样能在色谱柱及化合物之间产生或抑制π-π键的作用，也会产生不一样的选择性
小结
苯环或多元环上的邻、间、位的异构体，如下图，首推5-氟苯基柱
C8与PFP对比
